Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
2.6.10. ГИСТАМИН
Убивают морскую свинку массой от 250 до 350 г, которая была лишена пищи в течение предшествовавших 24 часов. Извлекают участок периферийной тонкой кишки длиной 2 см и опорожняют отделенную часть путем тщательной промывки раствором В, описанным ниже, с помощью шприца. К каждому из концов присоединяют тонкую нить и делают маленький поперечный разрез в центре фрагмента кишки. Помещают её в ванночку для органов, вместимостью от 10 до 20 мл, содержащую раствор B, поддерживаемый при постоянной температуре (от 340С до 360С), и пропускают через раствор смесь 95 частей кислорода и 5 частей диоксида углерода. Укрепляют одну из нитей рядом с дном ванночки для органов. Другую нить присоединяют к изотоническому миографу и регистрируют сокращения органа с помощью кимографа и другим подходящим способом непрерывной регистрации. Если используется рычаг, его длина должна быть такой, чтобы движение органа усиливались приблизительно в 20 раз. Натяжение кишки должно составлять около 9,8 мН (1 г) и быть отрегулировано в соответствии с чувствительностью органа. Промывают ванночку для органов раствором В. Выдерживают в течение 10 минут. Промывку раствором В повторяют еще 2 или 3 раза. Стимулируют серию сокращений путем добавления измеренных объемов от 0,2 до 0,5 мл раствора гистамина дигидрохлорида R, имеющего концентрцию, которая вызывает воспроизводимые субмаксимальные реакции. Эту дозу обозначают как «высокую дозу». Перед каждым добавлением гистамина ванночку для органов трижды промывают (предпочтительно, путем переполнения без опорожнения ванночки) раствором В. Последовательные добавления следует выполнять, соблюдая равные интервалы времени, достаточные для полной релаксации между добав-
лениями (около 2 минут). Добавляют равные объемы более разбавленного раствора гистамина дигидрохлорида R, приводящего к воспроизводимым реакциям, составляющим примерно половину от реакций, вызываемых «высокой дозой». Эту дозу обозначают как «малую дозу». Продолжают периодическое добавление «высоких» и «низких» доз раствора гистамина, следуя вышеуказанному, и чередуют каждое добавление с равным объемом разведения испытуемого раствора, регулируя степень разбавления таким образом, чтобы сокращение кишки, в случае его наличия, было меньшим, чем сокращение, вызываемое «высокой дозой» гистамина. Определяют, является ли сокращение, в случае его наличия, воспроизводимым и остаются ли реакции на «высокую» и «низкую» дозы гистамина неизменными. Вычисляют активность испытуемой субстанции, выраженную в ее эквиваленте на микрограмм основания гистамина, основываясь на определенном выше разведении.
Определенное таким образом количество не должно превышать количество, указанное в частной статье.
Если испытуемый раствор не вызывает сокращений, готовят свежий раствор, добавляя количество гистамина, соответствующее максимально допустимому в соответствии с требованиями частной статьи, и отмечают, соответствуют ли сокращения, вызываемые препаратом с добавкой гистамина, количеству добавленного гистамина. Если такого соответствия не наблюдается, или сокращение, вызываемое испытуемой субстанцией, не воспроизводимо, или последующие реакции на «высокие» и «низкие» дозы гистамина уменьшаются, то результаты испытания считают недостоверными и выполняют испытание на депрессорные ве-
щества (2.6.11).
Раствор А
Натрия хлорид 160,0 г
Калия хлорид 4,0 г
Кальция хлорид, безводный 2,0 г
Магния хлорид, безводный 1,0 г
Натрия гидрофосфат додекагидрат 0,10 г
Вода для инъекций R До 1000 мл
Раствор В
Раствор А 50,0 мл
Атропина сульфат 0,5 мг
Натрия гидрокарбонат 1,0 г
Глюкозы моногидрат 0,5 г
Вода для инъекций R До 1000 мл
Раствор В должен быть свежеприготовленным, и его используют в течение 24 часов.
2.6.11. ДЕПРЕССОРНЫЕ ВЕЩЕСТВА
Испытание проводят на кошке массой не менее 2 кг, анестезированной с использованием хлоралозы или барбитурата, что позволяет поддерживать постоянное кровяное давление. Животное защищают от потери температуры тела и поддерживают ее таким образом, чтобы ректальная температура оставалась в физиологических пределах. В трахею вводят дыхательную трубку. В общую сонную артерию вводят канюлю, наполненную гепаринизированным раствором хлорида натрия концентрацией 9 г/л, и присоединяют ее к устройству, обеспечивающему постоянную регистрацию кровяного давления. В бедренную вену вводят другую канюлю, наполненную гепаринизированным раствором хлорида натрия концентрацией 9 г/л, через которую может быть введен раствор гистамина и испытуемого образца. Определяют чувствительность животного к гистамину путем внутривенного введения через равные промежутки времени раствора гистамина R в дозах, соответствующих 0,1 мкг и 0,15 мкг основания гистамина на килограмм массы тела. Введение меньшей дозы повторяют не менее трех раз. Вторую и последующие инъекции вводят не ранее, чем через одну минуту после того, как кровяное давление возвращается к уровню, наблюдавшемуся непосредственно перед предыдущей инъекцией. Животное используют в испытании только в случае, если получено четко регистрируемое снижение кровяного давления, являющееся постоянным для меньшей дозы, а большая доза вызывает более высокую реакцию. Испытуемое вещество растворяют в растворе хлорида натрия концентрацией 9 г/л или в другом растворителе, указанном в частной статье и взятом в количестве, достаточном для получения предписанной концентрации. Вводят внутривенно на килограмм массы тела 1,0 мл раствора гистамина R, затем две последовательные инъекции предписанного в частной статье количества испытуемого раствора и, наконец, 1,0 мл раствора гистамина R. Вторую, третью и четвертую инъекции вводят не ранее, чем через одну минуту после того, как кровяное давление возвращается к уровню, наблюдавшемуся непосредственно перед предыдущей инъекцией. Эти серии инъекций повторяют дважды и завершают испытание введением 1,5 мл раствора гистамина R на килограмм массы тела.
